Un nuevo test molecular de Covid 19 fue aprobado con el gran trabajo de las Universidades de Quilmes y de San Martín.
En la página conicet.gov.ar se puede conocer el resultado del trabajo de investigadores del CONICET.
Este nuevo test es rápido, de bajo costo y fácil de maniobrar. Fue aprobado por la ANMAT (Administración Nacional de Medicamentos Alimentos y Tecnología Médica).
Se lo bautizó al kit como ELA-CHEMSTRIP, y no solo permite detectar el genoma del coronavirus SARS-CoV-2 en muestras de ARN con similar sensibilidad y especificidad que la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR, por sus siglas en inglés), técnica de referencia usada popr el ANLIS /Malbrán y los centros descentralizados, sino que también permite acortar los teimpos, reducir costos -con un equipamiento menos sofisticado, más económico con menor porcentaje de insumos importados- y no requiere ser maniobrado por personal altamente calificado.
Al igual que RT-PCR el nuevo kit permite hacer un diagnóstico temprano de Covid 19.
Este proyecto es producto de una asociación de las universidades de Quilmes y San Martín y las empresas de base tecnológica CHEMTST y Productos Biológicos SA (PB-L).
Diego Comerci, investigador del CONICET en el Instituto de Investigaciones Biotecnológicas 8IIBIO, CONICET-UNSAM) y socio de CHEMTEST, y Marcos Bilen, investigador del Consejo en el Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celuar (LIGBCM, UNQUI) y parte de PB-L, lideraron el desarrollo.
Las pruebas de validación de ELA-CHEMSTGRIP, hechas a partir de paneles de muestras de ARN, aportadas por el ANLIS/Malbrán, mostraron cerca del 96% de sensibilidad, es decir con muy pocos falsos negativos, y un 100% de especificidad, o sea no hubo ningún falso positivo.
Se aclara que las muestras positivas tenían distintos niveles de carga viral y correspondian tanto a pacientes sintomáticos como asintomáticos.
LAS ETAPAS
Se destacan tres etapas en el proceso de diagnóstico de Covid 19 mediante una técnica de base molecular como RT-PCR.
La primera es la extracción de una muestra respiratoria con un hisopado nasofaríngeo, seguida en caso de que el centro en el que se la realiza no cuente con cabinas de bioseguridad adecuadas, por una compleja logística de traslado.
La segunda, aislamiento o purificaciaón del ARN a partir del hisopado.
Tercera, testeo para detectar en forma fehaciente el material genético del virus en la muestra de ARN.
Se dice que en un país extenso como el nuestro, en el marco de la pandemia, la posibilidad de garantizar testeos a todos aquellos que lo necesiten, podría implicar dificultades económicas, de tiempo, infraestructurales, logísticas y hasta de acceso a recursos que deben importantes y tiene una alta demanda global.
El desafío plantado por los investigadores que empezaron su tarea en marzo en conjunto para poder integrar sus distintas experticias y conocimientos, fue dar respuestas a problemas que implican cada una de las fases mencionadas.
Diego Comerci señaló que la idea propuesta fue armar un sistema integral de detección de SARS-CoV-2 que sea simple de implementar y que pueda realizarse en todo el territorio, o sea, en centros de atención de baja complejidad, unidades móviles o incluso en laboratorios de campañas, que no cuentan con equipamientos sofisticados y costosos como un equipo de RT-PCR.
"Lo que se hizo fue pensar soluciones para cada una de las etapas para bajar los costos, disminuir los tiempos y ampliar las posibilidades de acceso al diagnóstico. "Esto también sirve para descomprimir la demanda existente sobre los centros de referencia que utilizan RT-PCR" sostuvo Marcos Bilen.
Sobre la primera etapa hay que decir que en la actualidad se trabaja en la posibilidad de colocar el hisopado sobre una solución que inactive el virus y permita evitar las complejas medidas de seguridad que requiere el traslado a centros alejados con las cabinas de bioseguridad necesarias.
En cuanto a la segunda los investigadores ya tienen con un kit de extracción de ARN viral que podrán acompañar el uso de ELA-CHEMSTRIP, que justamente es una alternativa a la necesidad de usar equipos de RT-PCR en la tercera fase.
SENSIBLE Y ESPECIFICA
Se dice que ELA-CHEMSTRIP se basa en una tecnología molecular de detección viral directa conocida como ELA (Easy Loop Amplification), que permite reconocer regiones específicas del genoma del SARS-CoV-2 en una muestra de ARN.
Al igual que RT-PCR y la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP, por sus siglas en inglés), ELA funciona bajo el principio de multiplicar el número de copias de pequeños fragmentos de ADN o ARN, como los que se aíslan de las muestras respiratorias tomadas a los pacientes mediantes hisopados para posibilitar la detección.
"ELA es una tecnología de amplificación isotérmica del genoma desarrollada por el LIGBCM y PB-L que a diferencia del LAMP, funciona a partir de enzimas producidas íntegramente en la Argentina, aisladas de bacterias autóctonas e incorpora componentes que hacen que sea mucho más específica que aquella, lo que reduce la posibilidad de arrojar falsos positivos" dijo Bilen.
La amplificación de regiones específica del genoma viral se conjuga con un método de visualización.
En el caso de ELA-CHEMSRIP se trata del sistema inmunocromatográfico bajo la forma de tiras reactivas de papel, en cuyo desarrollo y producción tiene amplia experiencia el consorcio conformado por IIBIO y CHEMTEST.
"Estos test funcionan en base a anticuerpos específicos que inmunocapturan las moléculas virales amplificadas en la reacción anterior -en caso de que en la muestra contuviera el material genético del virus- y señalizan el resultado a través de bandas de color en una tira de papel (como las pruebas de embarazo). ELA-CHEMSTRIP cuenta con dos anticuerpos que solo reconocen al producto amplificado correcto" sostiene Diego Comerci.
Una vez que se tiene aislada la muestra de ARN a analizar, el procedimiento es sencillo. La muestra es colocada en un tubo de reacción, junto con un complejo de enzimas, primers y sondas, e incubada a 60 grados durante cerca de 45 minutos.
En este paso, al ARN se retrotranscribe en ADN y solo en cso de que el material genético del SARS-CoV-2 esté presente se multiplican en forma exponencial las copias de determinadas regiones del genoma viral.
Luego se pone la tira reactiva de papel sobre la solución (dentro del tubo de reacción) y se espera hasta diez minutos.
Si al extraer la tira, esta muestra dos bandas coloreadas, significa que el paciente tiene COVID-19, si, en cambio, solo exhibe una franja de color quiere decir que no está infectado con SARS-CoV-2.
DESAFIO PRODUCTIVO
Comerci y Bilen coincideron en que había un desafío productivo , que era garantizar que en el país se pudiera producir a gran escala.
La capacidad instalada de CHEMTEST para fabricar tiras reactivas de papel inmunocromatográficas es clave parea que esto sea posible.
"De otra forma, el desarrollo no hubiera tenido senido al no ofrecer una verdadera solución a un problema de salud pública, como lo es el de garantizar un mayor acceso al diagnóstico de Covid 19 en el marco de la pandemia" advierte Bilen.
Hay idea de producir unas 100 mil unidades del kit por mes.
La primera partida será de 50 mil pero se estima que se fabricarán 130 mil el mes próximo.
"Esto fue posible gracias al apoyo y la coordinación de múltiples estamentos del Estado. En este sentido, en primer lugar, quisiera destacar el rol del Ministerio de Ciencia y Tecnología y especialmente las gestiones del Secretario de Articulación Científico-Tecnológica, Juan Pablo Paz, para restablecer el funcionamiento adecuado del ROECyT (Registro de Organismos y Entidades Científicas y Tecnológicas), gracias a lo cual pudimos ingresar veinte órdenes de compra al exterior en un solo mes.
Además, me gustaría agradecer la colaboración de Aerolíneas Argentinas, cuyos aviones sanitarios nos permitieron traer insumos clínicos de China y también, repatriar investigadores
que habían quedado varados en Alemania y Colombia.
Tampoco puedo dejar de mencionar la colaboración que recibimos de AFIP, Aduana, Jefatura de Gabinete, Cancillería, ANLIS/Malbrán y SENASA" concluyó Comerci.
LOS RESPONSABLES
He aquí los referenes de LIGBCM (UNQUI) PB-L
Marcos Bilen, investigador adjunto.
Daniel Ghirihnghelli, investigador principal.
Cristina Borio, investigadora asistente.
Julian Bergier, becario doctoral.
Lucas Ripoll, becario doctoral.
Victoria Nugnes, becaria doctoral.
Lorena Rojas, investigadora adjunta.
Yamila Santillán, becaria posdoctoral.
Damián Presti, becario posdoctoral.
Ana Ventura.
Vanina Rodríguez.
Cristian Mobilia.
Marcelo Romero.
Melisa Da Silva.
IIBIO (CONICET-UNSAM)/CHEMTEST.
Diego Comerci, investigador principal.
Juan Ugalde, investigador principal.
Andrés Ciocchini, investigador adjunto.
Luciano Melli, investigador asistente.
Josefina Caillava, becaria posdoctoral.
Stella Maris Landívar, becaria docoral.
Tamara Laube.
Agustina Carreño.
El trabajo publicado en Conicet.gov.ar está escrito por Miguel Faigón.
En la página conicet.gov.ar se puede conocer el resultado del trabajo de investigadores del CONICET.
Este nuevo test es rápido, de bajo costo y fácil de maniobrar. Fue aprobado por la ANMAT (Administración Nacional de Medicamentos Alimentos y Tecnología Médica).
Se lo bautizó al kit como ELA-CHEMSTRIP, y no solo permite detectar el genoma del coronavirus SARS-CoV-2 en muestras de ARN con similar sensibilidad y especificidad que la reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR, por sus siglas en inglés), técnica de referencia usada popr el ANLIS /Malbrán y los centros descentralizados, sino que también permite acortar los teimpos, reducir costos -con un equipamiento menos sofisticado, más económico con menor porcentaje de insumos importados- y no requiere ser maniobrado por personal altamente calificado.
Al igual que RT-PCR el nuevo kit permite hacer un diagnóstico temprano de Covid 19.
Este proyecto es producto de una asociación de las universidades de Quilmes y San Martín y las empresas de base tecnológica CHEMTST y Productos Biológicos SA (PB-L).
Diego Comerci, investigador del CONICET en el Instituto de Investigaciones Biotecnológicas 8IIBIO, CONICET-UNSAM) y socio de CHEMTEST, y Marcos Bilen, investigador del Consejo en el Laboratorio de Ingeniería Genética y Biología Molecular y Celuar (LIGBCM, UNQUI) y parte de PB-L, lideraron el desarrollo.
Las pruebas de validación de ELA-CHEMSTGRIP, hechas a partir de paneles de muestras de ARN, aportadas por el ANLIS/Malbrán, mostraron cerca del 96% de sensibilidad, es decir con muy pocos falsos negativos, y un 100% de especificidad, o sea no hubo ningún falso positivo.
Se aclara que las muestras positivas tenían distintos niveles de carga viral y correspondian tanto a pacientes sintomáticos como asintomáticos.
LAS ETAPAS
Se destacan tres etapas en el proceso de diagnóstico de Covid 19 mediante una técnica de base molecular como RT-PCR.
La primera es la extracción de una muestra respiratoria con un hisopado nasofaríngeo, seguida en caso de que el centro en el que se la realiza no cuente con cabinas de bioseguridad adecuadas, por una compleja logística de traslado.
La segunda, aislamiento o purificaciaón del ARN a partir del hisopado.
Tercera, testeo para detectar en forma fehaciente el material genético del virus en la muestra de ARN.
Se dice que en un país extenso como el nuestro, en el marco de la pandemia, la posibilidad de garantizar testeos a todos aquellos que lo necesiten, podría implicar dificultades económicas, de tiempo, infraestructurales, logísticas y hasta de acceso a recursos que deben importantes y tiene una alta demanda global.
El desafío plantado por los investigadores que empezaron su tarea en marzo en conjunto para poder integrar sus distintas experticias y conocimientos, fue dar respuestas a problemas que implican cada una de las fases mencionadas.
Diego Comerci señaló que la idea propuesta fue armar un sistema integral de detección de SARS-CoV-2 que sea simple de implementar y que pueda realizarse en todo el territorio, o sea, en centros de atención de baja complejidad, unidades móviles o incluso en laboratorios de campañas, que no cuentan con equipamientos sofisticados y costosos como un equipo de RT-PCR.
"Lo que se hizo fue pensar soluciones para cada una de las etapas para bajar los costos, disminuir los tiempos y ampliar las posibilidades de acceso al diagnóstico. "Esto también sirve para descomprimir la demanda existente sobre los centros de referencia que utilizan RT-PCR" sostuvo Marcos Bilen.
Sobre la primera etapa hay que decir que en la actualidad se trabaja en la posibilidad de colocar el hisopado sobre una solución que inactive el virus y permita evitar las complejas medidas de seguridad que requiere el traslado a centros alejados con las cabinas de bioseguridad necesarias.
En cuanto a la segunda los investigadores ya tienen con un kit de extracción de ARN viral que podrán acompañar el uso de ELA-CHEMSTRIP, que justamente es una alternativa a la necesidad de usar equipos de RT-PCR en la tercera fase.
SENSIBLE Y ESPECIFICA
Se dice que ELA-CHEMSTRIP se basa en una tecnología molecular de detección viral directa conocida como ELA (Easy Loop Amplification), que permite reconocer regiones específicas del genoma del SARS-CoV-2 en una muestra de ARN.
Al igual que RT-PCR y la amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP, por sus siglas en inglés), ELA funciona bajo el principio de multiplicar el número de copias de pequeños fragmentos de ADN o ARN, como los que se aíslan de las muestras respiratorias tomadas a los pacientes mediantes hisopados para posibilitar la detección.
"ELA es una tecnología de amplificación isotérmica del genoma desarrollada por el LIGBCM y PB-L que a diferencia del LAMP, funciona a partir de enzimas producidas íntegramente en la Argentina, aisladas de bacterias autóctonas e incorpora componentes que hacen que sea mucho más específica que aquella, lo que reduce la posibilidad de arrojar falsos positivos" dijo Bilen.
La amplificación de regiones específica del genoma viral se conjuga con un método de visualización.
En el caso de ELA-CHEMSRIP se trata del sistema inmunocromatográfico bajo la forma de tiras reactivas de papel, en cuyo desarrollo y producción tiene amplia experiencia el consorcio conformado por IIBIO y CHEMTEST.
"Estos test funcionan en base a anticuerpos específicos que inmunocapturan las moléculas virales amplificadas en la reacción anterior -en caso de que en la muestra contuviera el material genético del virus- y señalizan el resultado a través de bandas de color en una tira de papel (como las pruebas de embarazo). ELA-CHEMSTRIP cuenta con dos anticuerpos que solo reconocen al producto amplificado correcto" sostiene Diego Comerci.
Una vez que se tiene aislada la muestra de ARN a analizar, el procedimiento es sencillo. La muestra es colocada en un tubo de reacción, junto con un complejo de enzimas, primers y sondas, e incubada a 60 grados durante cerca de 45 minutos.
En este paso, al ARN se retrotranscribe en ADN y solo en cso de que el material genético del SARS-CoV-2 esté presente se multiplican en forma exponencial las copias de determinadas regiones del genoma viral.
Luego se pone la tira reactiva de papel sobre la solución (dentro del tubo de reacción) y se espera hasta diez minutos.
Si al extraer la tira, esta muestra dos bandas coloreadas, significa que el paciente tiene COVID-19, si, en cambio, solo exhibe una franja de color quiere decir que no está infectado con SARS-CoV-2.
DESAFIO PRODUCTIVO
Comerci y Bilen coincideron en que había un desafío productivo , que era garantizar que en el país se pudiera producir a gran escala.
La capacidad instalada de CHEMTEST para fabricar tiras reactivas de papel inmunocromatográficas es clave parea que esto sea posible.
"De otra forma, el desarrollo no hubiera tenido senido al no ofrecer una verdadera solución a un problema de salud pública, como lo es el de garantizar un mayor acceso al diagnóstico de Covid 19 en el marco de la pandemia" advierte Bilen.
Hay idea de producir unas 100 mil unidades del kit por mes.
La primera partida será de 50 mil pero se estima que se fabricarán 130 mil el mes próximo.
"Esto fue posible gracias al apoyo y la coordinación de múltiples estamentos del Estado. En este sentido, en primer lugar, quisiera destacar el rol del Ministerio de Ciencia y Tecnología y especialmente las gestiones del Secretario de Articulación Científico-Tecnológica, Juan Pablo Paz, para restablecer el funcionamiento adecuado del ROECyT (Registro de Organismos y Entidades Científicas y Tecnológicas), gracias a lo cual pudimos ingresar veinte órdenes de compra al exterior en un solo mes.
Además, me gustaría agradecer la colaboración de Aerolíneas Argentinas, cuyos aviones sanitarios nos permitieron traer insumos clínicos de China y también, repatriar investigadores
que habían quedado varados en Alemania y Colombia.
Tampoco puedo dejar de mencionar la colaboración que recibimos de AFIP, Aduana, Jefatura de Gabinete, Cancillería, ANLIS/Malbrán y SENASA" concluyó Comerci.
LOS RESPONSABLES
He aquí los referenes de LIGBCM (UNQUI) PB-L
Marcos Bilen, investigador adjunto.
Daniel Ghirihnghelli, investigador principal.
Cristina Borio, investigadora asistente.
Julian Bergier, becario doctoral.
Lucas Ripoll, becario doctoral.
Victoria Nugnes, becaria doctoral.
Lorena Rojas, investigadora adjunta.
Yamila Santillán, becaria posdoctoral.
Damián Presti, becario posdoctoral.
Ana Ventura.
Vanina Rodríguez.
Cristian Mobilia.
Marcelo Romero.
Melisa Da Silva.
IIBIO (CONICET-UNSAM)/CHEMTEST.
Diego Comerci, investigador principal.
Juan Ugalde, investigador principal.
Andrés Ciocchini, investigador adjunto.
Luciano Melli, investigador asistente.
Josefina Caillava, becaria posdoctoral.
Stella Maris Landívar, becaria docoral.
Tamara Laube.
Agustina Carreño.
El trabajo publicado en Conicet.gov.ar está escrito por Miguel Faigón.
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